常见食用菌品种母种制作技术

一、常见母种培养基有以下几种：

1.PDA培养基：马铃薯200g、琼脂1820g、葡萄糖20克g，水1000ml，pH自然。此培养基广泛适用于各种菇类，但不适合草菇、猴头菇菌丝的生长。

2.马铃薯综合培养基：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁1.5 g，维生素B15～10g，水1000ml，pH自然。此配方适合鸡腿菇、平菇、双孢蘑菇、金针菇、草菇等菇类菌丝生长。如在配方中加入蛋白胨20g，猴头菇菌丝生长会更加旺盛、粗壮。

二、母种培养基的制作方法如下：

1.浸煮容器   一般选用玻璃容器、不锈钢锅或铝锅、搪瓷锅等，生产中不能用铁锅、铜锅，以免铁锈、铜锈混进培养基。

2.配制方法  先按照培养基配方准确称量培养基的各种成分，再进行配制。以配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基为例，介绍其培养基配制方法如下。

选整齐且没有芽变（芽变绿）的马铃薯，洗净去皮并挖掉芽眼，切成薄片，称取200g放入容器内，加入1 000ml水，加热煮开15～30分钟，至酥而不烂的程度，用四层纱布过滤（见图1所示），取其滤液，加开水补足1 000ml。然后在煮汁中加入称量好的琼脂，用小火加热，并不断用玻璃棒搅拌，至琼脂全部融化，再用纱布过滤一次，倒入量杯，用开水补足1 000ml。再加入葡萄糖(或蔗糖)，用小火再煮几分钟并用玻璃棒不断搅拌，待葡萄糖（或蔗糖）全部融化，停火倒入量杯并用开水补足1 000ml。在配制过程中，先加入主要元素，再加入微量元素，最后加入维生素或生长素等。如需让培养基清亮透明，可用纱布将煮好的培养基趁热过滤一次，倒入容器，待用。

3.分装   培养基配好后，应趁热将其分装到试管内，以免琼脂冷凝。分装时应避免培养基粘附在试管口，若琼脂粘住棉塞，既影响接种又容易滋生杂菌。分装时可用漏斗分装，装入试管中的量，最好不要超过试管长度的1/5，如图2所示。

4.塞棉塞   培养基分入试管后，应立即塞好棉塞。应用普通棉花（不能用脱脂棉，因其易吸水变潮，滋生杂菌）做棉塞。棉塞塞入试管的长度应为棉塞长度的2／3，松紧度适中，既能保持通气又能防止杂菌污染，即用手握住棉塞，试管不能掉下，稍微用力才能把棉塞拔下为好，见图3。

塞好棉塞后，每5支或7支包扎一捆，棉塞部分用牛皮纸或旧报纸用绳捆好。包纸的作用是防止灭菌时冷凝水淋湿棉塞，并防止接种前培养基水分散失或受杂菌污染。

5.灭菌及摆斜面   试管包扎好后，放入手提式高压锅的消毒桶内，盖盖灭菌。待压力升至0.05兆帕时，打开排气阀，放净锅内冷空气，再加压至0.15～0.17兆帕，维持30分钟，停止加热。待锅内压力下降为0后，先将锅盖打开一小缝，使热气溢出，停3～5分钟后，再打开锅盖。利用锅内的余热将棉塞烘干，防止棉塞受潮。待温度降至60℃左右，再摆成斜面，以防止冷凝水在试管内积聚过多。

摆放斜面时，试管塞棉塞的一头下面垫厚1厘米的木板或钢板等，斜面长度不要超过试管长度的1／2，待冷却后即成斜面培养基，如图4、图5所示。

6.无菌培养  灭菌后的培养基，应随机抽取几支放在25℃左右的恒温箱内培养2～3天，若无杂菌生长，便可做菌种使用。

 

三、母种的转管与培养  

母种的转管培养即将一支长满菌丝的试管在无菌操作下，分别转接到多只试管中培养。一般每支母种可扩接30～50支，生产上供应的多为子代母种。它可以再次转管扩接。一般每支又可扩接成20～25支子代母种。母种的转管与培养需注意两个关键问题，一是转管接种箱要严格消毒，二是转管次数不宜过多，因转管代数过多易使菌种生活力降低，转管次数在4次以内为宜。

1.接种箱消毒  首先用金星消毒液或其他消毒药品，把接种箱内擦拭干净，然后放入分离所得的母种和试管培养基、接种工具、酒精灯、火柴及盛放高锰酸钾与福尔马林反应的碗（按福尔马林10ml/m3＋高锰酸钾5g放入所盛碗内），立即封闭接种箱，让其发生反应，密闭熏蒸30分钟。也可用烟雾消毒盒5～6g/m3，密闭熏蒸30分钟。

   2.转管  操作者在转管前，应穿好工作服，剪好指甲，洗净手。将手通过袖筒伸入接种箱内，再用酒精棉球把手及裸露的手腕擦拭一遍。点燃酒精灯，左手持1支分离母种试管和1支斜面培养基，右手拿接种钩（见图6-a），首先将接种钩在酒精灯外焰上灼烧灭菌，接着用右手小指和无名指把斜面母种上的棉塞在火焰上拔掉（见图6-b、图6-c），将接种钩伸进斜面菌种试管，稍冷却后，将母种斜面上的老菌块及干燥部分挖掉，弃之不用，然后取一小块麦粒大小（1cm×0.3cm）的菌种块（一定要带培养基）移接到斜面培养基的中央，抽出接种针，灼烧试管口，迅速将棉塞通过火焰烤一下塞上（见图6-d、图6-e、图6-f）。在试管上贴上标签。以此类推。直至把接种箱内斜面培养基接完为止，一般由一个人独立完成。此操作中既要注意试管口和接种钩始终不要离开火焰无菌区，还要注意避免火焰烧死菌种。

 

3.培养  菌种接好后，直接转入培养箱或培菌室内培养，温度调节在24～28℃，并注意培养室内的通风换气，遮掩窗户，避免光线过强，经常检查，及时拣出杂菌污染的试管，确保菌种纯度。菌种菌丝长满试管后，或及时使用，或放置在4℃以下的冰箱内低温保藏。

值得注意的是：母种培养基制作过程中，严格按照无菌操作规程进行。选好培养基配方，按其比例严格称量原料，不可多也不可少，否则菌丝生长会受到严重影响。制作好的母种培养基，可用于母种的分离培养、提纯复壮及转管、保藏等。

四、纯种分离  

生产上常用组织分离法进行母种菌种的分离。组织分离法是从种菇上切去一小块组织移接于试管斜面培养基，经培养获得菌种的方法。该方法具有操作简单，有利于保持原来品系的遗传特性，成功率高等特点。

1.种菇选择  选种菇时，应到生长旺盛、无严重病虫害的丰产区，采取菇朵圆整、菇体洁白、菌盖肥厚且紧密硬实、菇柄短且粗壮，具有原品种优良性状、6～7成熟的第二茬单生菇作为种菇。

2.种菇消毒  种菇选好后，去除表面杂质及菌柄，用75%的酒精棉球擦试种菇表面，然后把斜面试管随同接种工具（如接种刀、接种铲、接种钩、镊子等）一同放入接种箱内，用气雾消毒剂5g/m3点燃密闭熏蒸30分钟。

3.分离  用消毒过的接种刀，把种菇纵剖为二，在菇盖与菇柄连接处的部位，切取绿豆粒大小（约0.2cm×0.2cm）的菌肉，移接到斜面培养基的中央。然后把接好的试管放入恒温25℃的无菌环境中培养，2～3天后，组织块就能长出白色菌丝，经检查、优选，选出菌丝生长旺盛且无杂菌的试管，作为母种，用于生产或保藏。