食用菌菌种的概念,原指食用菌的孢子,这里将纯菌丝体连同培养基质一一同叫做菌种。根据菌种的培育过程,固体培育的菌种被分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)。母种是菌种选育后在试管培养基中繁殖而成,用于繁殖原种,也可保藏菌种做种源。原种是母种菌丝在固体培养基上扩繁而成,这个扩繁过程增强了菌丝对培养环境的适应性。栽培种是原种进一步扩繁而成,增加的是菌种的量,原种和栽培种都可以直接出菇。液体菌种是指生长在液体培养基中的菌种或菌丝体。对于液体菌种来说,母种可以直接作为原种使用或用于生产原种,没有了三级的分别,简化了生产工艺。液体菌种生产使用了封闭运行的工业发酵设备,可得到高纯度萌发迅速的菌种,不容易被污染。固体培育的菌种需经过几次的扩繁,扩繁过程中有灭菌、接种、培育等过程,每个环节都容易受到污染。
1. 食用菌菌种生产过程中可能的污染源
1.1 菌种原发污染、接种过程污染
用于扩繁的菌种本身不纯,种源存在污染。种源污染一般都是隐性的,不容易被发现,往往都是在扩繁过程中被发现,繁育的菌种污染普遍,不是某一瓶某一袋的问题,损失一般较大。接种过程污染是由于条件限制,设备简陋,无菌操作不规范,技术性差而造成的污染。
1.2 器皿、材料、培养基质污染
这种污染是由于灭菌过程存在问题,灭菌不彻底,或器皿(袋)破裂二次污染造成的。培养基质料含有单宁或香料类防腐化学物质(杉、松、樟木质含有的醇、脂、醚),造成菌种吃料萎缩,菌丝无法正常生长和蔓延。
1.3 环境污染、技术控制不当造成的污染
由于环境温度高、过于潮湿,各种杂菌容易滋生造成感染,另外就是虫、鼠危害,造成外源性污染。
在培养基质料制作过程中,pH值、C/N比例、水分含量等的不适合,在培养过程中光照、氧气含量、CO2浓度、温度、湿度等条件控制不当,都会造成菌种生长环境不理想,菌种的生理活动受抑制,菌丝不能快速生长占据整个培养基质空间,给其他菌入侵和繁育(菌类竞争)造成条件,从而放大了污染的影响。
2. 食用菌菌种生产关键控制点
2.1 种源的选择、灭菌处理
选择没有污染,菌丝生长健壮的适龄母钟或原种,这样可从源头控制污染。选择适龄母种或原种可保证菌丝在培养基质的快速生长,减小其他杂菌繁殖污染的机会。在接种前除认真检查外,接种时还应弃置部分表层菌种,因为这部分菌种在培养过程中受外源污染几率大,弃置这部分可防止一些隐性的外源性污染源。具体做法是接种最好破开瓶底,从底部开始使用,弃置上部2~3cm表层菌种不用,如从上部开始接种,应当挖掉瓶或袋上部2~3cm表层不用。
灭菌处理是菌种生产的重要一环。灭菌处理包括生产环境灭菌和器皿、培养基质料的灭菌。环境灭菌可采用紫外光照、药物熏蒸、药物喷洒等综合方式,重点是不留死角,同时要保持环境清洁,不留存菌类生存繁育物质条件。器皿、基质料灭菌主要是在杀菌锅内摆放问题,必须保证蒸汽的流动空隙通道,使每个器皿都得到蒸汽的热力“洗刷”。对培养基质的灭菌有2项注意:拌料水分均匀,使基质料水分吸透,不存在局部基质料水分不足问题,可在杀菌前搅拌和闷制,使水分均匀至基质料的任何细微结构,有利于杀菌时湿热的均匀传递,保证全部基质料受热均匀;在杀菌过程中,要充分排除杀菌锅内的空气,防止锅内存在“气包”,气包即未排除的空气包裹了要杀菌的器皿或基质料,形成空气保护层,使蒸汽湿热不能到达和穿透,影响杀菌。高压杀菌结束锅体泄压要缓,防止水汽突然膨胀冲击器皿和基质料,造成基质料膨胀污染瓶、袋口。出锅要适时,防止形成凝结水或基质料由于内部温度高造成表层水分蒸发。
2.2 生产条件控制、生产过程技术控制
菌种生产区域要防虫防鼠,封闭合理,防止外源污染。应有空气调节设备来保证生产温度、湿度、空气新鲜。条件差的应该避开不利气象条件,选择适合的季节及天气进行生产。时刻注意生产环境温度、湿度、光照、空气的变化,采取措施,为菌种培育提供适合条件,使菌丝快速吃料生长,形成茂盛的生长环境,不给其他菌入侵和繁育造成条件。
接种过程严格按照无菌操作规程进行,采用优质袋并在生产过程尽量防止袋的破损,接种要利落,禁止瓶口处沾有培养基质,棉塞松紧要合适,并保持棉塞干燥卫生。培养基质料选取要避免含单宁、香料化合物,合理控制基质料的透气性、水分活度、pH、C/N比例和各种营养添加,保证菌丝吃料快,生长迅速。按时巡检培养的菌种,发现问题及时处理,避免影响扩大。